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如何科学正确地使用冻存管丨冷冻步骤
点击次数:1047 发布时间:2021-08-16

冻存管的使用是一门学问,并不是打开液氮罐、放入冻存管、关上液氮罐这样简单的三部曲可以完成的。科学正确地使用冻存管,可以避免样本的损失,并保护试验人员的安全。

 

冻存管:冷冻步骤

 

用预热的PBS溶液洗涤细胞,吸取溶液,含有胰蛋白酶和EDTA的溶液覆盖细胞(薄薄的液层足够,胰蛋白酶和EDTA的浓度需要根据细胞系确定)。

37℃孵育细胞3-5分钟。

细胞从底部脱离之后,终止孵育,加入含有血清的培养基,用移液器轻轻地悬浮细胞。

离心细胞悬液(500 x g, 5分钟),用含有血清的培养基重新悬浮。

细胞计数。

离心细胞悬液(500 x g, 5分钟),去除上清液,用适量体积的含有血清的培养基重新悬浮细胞。

以1:1体积比混合细胞和冻存液(60%培养基,20%胎牛血清,20% DMSO),然后转移到Cryo.sTM冻存管中。冻存的细胞密度为 1-5×106 个/毫升。

含有细胞的Cryo.sTM冻存管建议以−1 K / min 的速率降温,可以将冻存管置于−70℃含有异丙醇的容器中。如果Cryo.sTM冻存管存储其他样品,可以直接放置在−20℃,−70℃或者液氮的气相。为了确保样品冷冻均匀,4 mL和5 mL的Cryo.sTM冻存管需要先置于在−20℃冰箱过夜,然后再转移到−70℃或者液氮的气相。

然后转移Cryo.sTM冻存管到液氮罐。为了避免污染(如支原体)和安全考虑,请将Cryo.sTM冻存管置于液氮的气相,切勿置于液相。

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